涉及质粒的一种典型蛋白质表达工作流程
当下游应用要转染哺乳动物细胞系或将质粒注入动物模型时，则需要大量质粒DNA（中提、大提、超大量提取或者宏量提取）。例如，典型的大量提取使用-mL细菌培养物，产生高达1mg的质粒。这些应用的一个非常重要的要求是高纯度的质粒DNA，尤其需要使用鲎试剂（LAL）或其他检测方法进行内*素和热原测试来确定。内*素是革兰氏阴性菌细胞壁上的特有成分，主要是脂多糖中的类脂A，在细菌被裂解时被释放出来，由于其化学结构和特性，在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内*素的存在会造成细胞死亡，严重的影响质粒转染细胞的效率。此外内*素会激活造血细胞（如B细胞、巨噬细胞等）的非特异免疫反应，造成实验的假阳性，同时会引起机体体温升高、腹泻和出现出血性休克和其他组织损伤现象，使得其成为在基因疫苗生产过程中纯化质粒DNA时需要去除的杂质之一。InvitrogenPureLinkExpi无内*素质粒纯化试剂盒采用新型专有阴离子交换树脂，以现行标准方案约一半的时间分离高级转染级质粒DNA，获得内*素水平低于0.1EU/μg的质粒，推荐应用于敏感细胞（原代细胞、干细胞）的转染、基因疗法研究、基因组工程和蛋白质表达等。
InvitrogenPureLinkExpi无内*素质粒纯化试剂盒采用增强型树脂结合真空辅助工作流程，将纯化时间大大缩短至2小时内。该方案快速、简单，产品组合可实现高通量、高可靠性和可扩展性。产品特点包括：节省大量时间节省了重力流柱的使用时间；在短至90min（大量）和2h（超大量和宏量）的时间内纯化无内*素质粒DNA。图1.快速纯化高产量无内*素质粒DNA。与供应商Q的无内*素试剂盒相比，PureLinkExpi试剂盒可以更短的时间获得高产量无内*素高级转染级质粒DNA。与供应商Q的无内*素重力流试剂盒相比，先进的阴离子交换技术和真空辅助功能相结合，缩短了整体方案时间。
高产量用大提、超大量提取和宏量提取试剂盒分离高品质质粒DNA，产量分别高达1.5mg、5mg或15mg。
获得内*素含量低于0.1EU/μg的质粒，适用于敏感型应用，如原代细胞的转染和基因治疗或质粒疫苗研究。
图2.与竞争对手的试剂盒相比，使用PureLinkExpi试剂盒可获得高产量无内*素高级转染级质粒DNA。根据产品手册的描述，使用PureLinkExpi和供应商Q的无内*素大提、超大量和宏量试剂盒纯化两个具有不同骨架的高拷贝数质粒。DNA的产量数据如图所示；仅提供了PureLinkExpi试剂盒纯化的内*素值（EU/μg）。
无内*素质粒获得内*素含量低于0.1EU/μg的质粒，适用于敏感型应用，如原代细胞的转染和基因治疗或质粒疫苗研究。图3.质粒DNA适用于敏感细胞系的转染。众所周知，肝细胞系Huh7在转染期间对内*素水平非常敏感。测量使用荧光素酶表达质粒转染的Huh7细胞的荧光素酶活性，其采用PureLinkExpi系统或供应商Q无内*素系统进行纯化
兼容性广与GibcoTMExpiCHOTM和ExpiTM瞬时哺乳动物表达系统兼容。GibcoExpiCHO表达系统可在悬浮培养中提供快速、超高产量的蛋白生产，同时实现蛋白质的绝佳表达。对于研究人员而言，蛋白质表达和纯化相容的产品非常适用于某些下游应用。图4.使用PureLinkExpi试剂盒纯化的质粒DNA与GibcoExpi和ExpiCHO表达系统兼容。使用Expi和ExpiCHO表达系统、兔IgG重链和轻链质粒的阳性对照对细胞进行转染，其中这些质粒采用PureLinkExpi超大量试剂盒或供应商Q的无内*素超大量制备试剂盒进行纯化。上述滴度值在Expi表达系统的预期输出范围内。
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