1.限制性核酸内切酶识别并切割特定的脱氧核苷酸序列2.限制性核酸内切酶破坏磷酸二酯键3.限制性核酸内切酶的意义：作为切割DNA的手术刀，使DNA重组成为可能4.限制性核酸内切酶来源于微生物5.限制性核酸内切酶已被发现了数千种6.限制性核酸内切酶所切的脱氧核苷酸片段必为中心对称7.被限制性核酸内切酶切割后，伸出双链的DNA单链片段叫粘性末端8.同一种限制性核酸内切酶切割出来的同一段脱氧核苷酸序列的两段粘性末端互补9.限制性核酸内切酶只能切DNA，不能切RNA10.限制性核酸内切酶从DNA轴中垂线切，生成平末端，很难再连；而从轴的一端切到另一端，生成粘性末端，易重新相连11.一种限制性核酸内切酶只能切一种脱氧核苷酸序列，体现酶的专一性12.限制性核酸内切酶从所识别的第一个和第二个脱氧核苷酸之间切断磷酸二酯键，并在其中心对称点切出13.粘性末端的连接需要DNA连接酶14.DNA连接酶的化学本质是蛋白质15.DNA连接酶连接的是互补的粘性末端的磷酸二酯键16.DNA复制中，使脱氧核苷酸链增长，连接脱氧核苷酸形成磷酸二酯键的酶叫DNA聚合酶；肺炎双球菌转化实验中水解DNA的叫DNA水解酶，简称DNA酶17.DNA连接酶连接粘性末端的脱氧核苷酸的磷酸二酯键；DNA聚合酶连接脱氧核苷酸链与游离脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键18.DNA连接酶是DNA片段的连接工具19.基因转移的工具是载体20.载体不是运输物质，是运输基因21.提供基因的一方叫供体，被导入基因的一方叫受体22.载体的作用：将外源基因运输到宿主细胞内23.载体的特点：1）有1个到多个限制性酶切点，即可运输1个到多个外源基因2）对受体细胞无害3）导入基因能在受体细胞内复制、表达，且能稳定存在4）选择某些标记基因，使其便于筛选，观察受体是否进入细胞5）结构简单、大小适中24.常用载体：质粒、动植物病*、λ噬菌体25.质粒是在细菌中，独立于拟核DNA之外存在，能够自主复制的双链环状DNA分子26.质粒有特殊的遗传标记，在受体细胞中能独立存在27.基因工程的原理：基因重组28.PCR技术：1）将模板DNA在94oC环境下解旋；2）退火至55oC，引物与模板单链DNA特定互补部位相配对结合；3）回到72oC时，DNA聚合酶在引物之后使合成新链延伸，形成DNA双链；引物：人工合成的一段脱氧核苷酸单链；原料：模板DNA、引物、DNA聚合酶、游离脱氧核苷酸29.PCR技术就是在体外通过酶促反应选择性地扩增DNA片段的技术30.PCR技术特征：双链DNA呈指数扩增31.PCR技术中DNA聚合酶需耐高温32.基因文库：基因保存在受体菌中33.基因文库没有直接保留目的基因，而是保管受体菌34.基因组文库：含一种生物的全部基因；部分基因文库：只含一种生物的部分基因35.通过化学方法合成或PCR级数可获得已知目的基因序列；通过基因文库可以获得未知目的基因的序列36.建立基因文库方法：1）PCR技术2）反转录法38.基因工程的基本原理：使目的基因在宿主细胞中稳定和高效地表达39.反转录法：目的基因mRNA单链DNA→双链DNA→导入受体菌中保存→部分基因文库40.基因工程的基本原理：使目的基因在宿主细胞中稳定和高效地表达41.基因工程基本操作步骤：1）目的基因的获得；2）重组DNA形成；3）重组DNA导入受体细胞（也称宿主细胞）；4）筛选含有目的基因的受体细胞；5）目的基因的表达43.受体细胞常用的有：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、动植物细胞44.受体细胞的特点是繁殖快45.基因工程中的关键是形成重组DNA46.重组DNA导入受体细胞的方法：1）植物农杆菌转化法、花粉管法（原生质体也可以用显微注射法）；2）动物显微注射法；3）微生物：用CaCl2处理（增加细胞壁通透性）47.可以利用培养基来筛选含有目的基因的受体细胞48.基因工程最大的优点：目的性强，定向地改造生物性状；克服远源杂交不亲和49.转基因生物是指转入了外源基因的生物，不一定要表达50.植物转基因可以1）提高农作物的抗逆性2）改良农作物品质3）制作植物生产药物疫苗51.抗虫棉和转基因烟草为转基因植物52.动物转基因可以：1）改良动物品种2）建立生物反应器3）器官移植53.基因工程可用于基因工程药物和基因治疗54.基因工程的核心是构建重组DNA分子55.基因工程五步流程中，涉及碱基互补配对原则的有1）提取目的基因（仅化学方法涉及）；2）重组DNA的形成；5）目的基因的表达
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