老师好睡前故事羊续悬鱼廉吏的故事 http://www.aomens.com/jwyshxx/95950.html一、思维导图：基因工程
二、练习
1.为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。
下列操作与实验目的不符的是
A．用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和连接酶构建重组质粒
B．用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞
C．在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞
D．用分子杂交方法检测C基因是否整合到菊花染色体上
C
据图分析可知，在目的基因的两端、启动子和终止子之间都有限制性核酸内切酶EcoRⅠ的切割位点，因此可以用限制性核酸内切酶EcoRⅠ切割目的基因和运载体，之后再用DNA连接酶连接形成基因表达载体，A正确；将目的基因导入到植物细胞，常用农杆菌转化法，可以将目的基因C导入到农杆菌的Ti质粒的T-DNA段，之后再用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞中染色体上的DNA上，B正确；图2中显示标记基因是潮霉素抗性基因，应该在培养基中添加潮霉素，筛选被转化的菊花细胞，C错误；要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术，D正确。
2.某种荧光蛋白（GFP）在紫外线或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病*的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5’末端，获得了L1-GFP融合基因（简称为甲），并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。
回答下列问题：
（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是________。使用这两种酶进行酶切是为了保证_______，也是为了保证__________。
（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了__________和___________过程。
（3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的________移入牛的________中，体外培养、胚胎移植等。
（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定，在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞的____________（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。
（1）E1和E4；甲的完整；甲与载体正确连接
（2）转录；翻译
（3）细胞核；去核卵母细胞
（4）核DNA
（1）注意题干已经说了甲是融合基因，设问又说使用了两种限制酶，所以为了保证甲的完整性，应选择E1、E4，这样同时还能保证甲与载体正确连接（避免反向链接）。（2）在该细胞中观察到了绿色的荧光，说明已经表达出了蛋白质。（3）核移植，略。（4）克隆牛利用的是细胞核移植技术，遗传物质来自于细胞核，所以用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的核DNA作为PCR模板。
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